taqman探针和那条链结合,一条链和双链中的一条链结合

taqman探针和那条链结合,一条链和双链中的一条链结合

与其他PCR反应一样，基于TaqMan的反应需要双链模板以及两个相当标准的目标特异性引物，但与传统PCR中使用的引物不同，TaqMan检测需要第三个特定序列，称为探针。 当探针与引物在两个方面非常相似进行PCR扩增时，将一对引物、特定的TaqMan探针（5'端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团）和模板DNA混合，开始时，探针与任何单链DNA和报告基团完全结合

自上世纪90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）新技术不断涌现，但作为经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是众多实验研究者进行定量检测的首选。 主要是因为与TaqMan探针相比，它由目标序列、荧光素和猝灭剂三部分组成。 目标序列是与待检测DNA序列互补的短链DNA，目标序列的两端分别连接有荧光素和猝灭剂。 当TaqMan探针与待检测的DNA序列结合时

TaqMan荧光定量PCR的基本原理是将特异性引物与探针（通常是双链DNA，其中一个含有荧光探针）结合起来，构建特异性的逆转录酶链式反应体系。 系统中的特异性引物被酶水解，TaqMan探针法qPCR是使用TaqMan荧光探针进行荧光检测的方法。 基本原理是在PCR扩增过程中，同时添加一对引物和特异性荧光探针，探针两端分别标记报告荧光基团和猝灭荧光基团。 起始时间

目前，常用的两种方法是Reethedye法和TaqManprobe法。 染色方法：我们常用的染料是SYBRGreenI。 该染料具有以下特点：该染料能与双链DNA的小沟非特异性结合，而不与单链结合。GC含量在30%～80%之间。在适当情况下，C含量大于G。 含量过高会降低反应效率，此时可选择另一条互补链作为探针，避免单核苷酸形成串，如GGGGG。 ●绑定位置探针退火时，应尽量靠近上部

其次，由于分型探针处于同一反应体系中，不同探针与模板的结合是竞争状态，这就要求不同分型探针与模板的结合位置需要重叠。 这确保只有一种类型的探针与一个模板结合。 QPCR中Taqman探针法和染料法的简单易懂的区别(6)发表于2021-11-1417:00·11,000浏览量同意2添加评论分享收藏喜欢报告分子生物学Q-PCR细胞生物学生物学研究医学